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木门百合子房作外植体

发布时间:2013-10-30作者:admin浏览量:


激素对愈伤组织形成的作用将长0.5〜1.0 cm的子房切段,分别接种于不同激素水平的诱导 培养基(表1)上。培养10 d左右,子房开始膨大,子房壁变绿增厚。两周后胚珠均发生显著的膨大,但未 能诱导出愈伤组织。培养30 d后,胚珠开始发黄,然后发生褐变死亡,而在培养25〜50 d后,子房壁于切 口处开始产生淡黄色愈伤组织。由表1可见,7号培养基培养的外植体最先出现愈伤组织,愈伤组织诱导 率为56%,45 d后,愈伤组织变绿;1号培养基诱导率最高(76%),诱导形成的愈伤组织为淡黄色,质地 疏松,以后愈伤组织逐渐长大变绿,但也有一些外植体不能产生愈伤组织;4号培养基愈伤组织出现最 迟。说明1号培养基最适合诱导愈伤组织,愈伤组织质地疏松,几乎没有褐变现象。

试验过程中还观察到在各种培养基上培养的外植体均有褐变致死的现象,其中以7号培养基最严 重,1号培养基最轻微。在自然状况下生长的百合大多带菌,且体内含有较多的酚类物质,致使外植体容 易褐变、坏死。因此,防止褐变是离体快繁中的重要问题。
表1激素配比对木门百合子房愈伤组织的诱导反应 Tab. 1 Induced reaction of various hormone on inducing rate of callus
培养基编号 Medium No. 附加激素及浓度/mg-L-1 Concentration of hormone 接种数 Explant number 产生愈伤组织数愈伤组织诱导率/% Callus number Inducing rate of callus  诱导时间/d Days for callus appearance
1 6 -BA 1.0 -i- NAA 0. 5 25 19 76 30
2 6 -BA 1.0 + NAA 1. 0 25 16 64 39
3 6 ~BA 0. 5 + NAA 0. 5 25 10 40 45
4 6 -BA 0. 5 + NAA 1. 0 25 11 44 50
5 KT1.0 + 2,4-D 1.0 25 15 60 29
6 KT2.0 + 2,4 ~D 2. 0 25 18 72 28
7 KT4. 0 + 2,4 ~D 4. 0 25 14 56 25

2.1.2激素配比与芽分化的关系将形成的愈伤组织移入分化培养基(表2)中培养10〜15 d后,表面 形成许多绿色球状突起,35〜45 d后发展成不定芽(45 d统计发芽率),同时,在很多愈伤组织上有不定 根生成。在1号培养基上的愈伤组织分化的芽最多,形成的小苗壮实,伴有少量根形成。在其他的培养基 上生长的愈伤组织褐变现象较严重,诱导芽的数量较少,小苗长势较弱。在2号培养基中愈伤组织生长 困难,芽分化少,同时伴有较多的根生成。3号培养基上易发生褐化,苗生长较弱,愈伤组织生长缓慢。 在4号培养基上的愈伤组织生长最旺盛,但分化的芽最少。在5号培养基中愈伤组织最先诱导出芽,芽的 分化率较高,形成的根也最多,苗生长最壮,但褐变致死率也最高。说明1号培养基最适合诱导芽的分

2-2叶片培养

鲜切花枝的幼嫩叶片经消毒灭菌后,切成0.5 cmX0.5 cm见方的小块,分别接种到表1所列的诱 导培养基上。培养10 d左右,所接种的叶块逐渐失绿、萎蔫,继代培养也不能诱导出愈伤组织,但用 诱导出再生苗的无菌嫩叶接种在MS+6-BA 1. 0 mg/L + NAA 0.1 mg/L的培养基上,10d后,切口 处膨大并产生淡黄色愈伤组织,一个月左右可形成大量黄色愈伤组织,诱导率可达70%以上,继代培 养基不变,20〜30 d继代培养一次,40 d可分化出幼芽,个别外植体在形成幼芽的同时有根生成,继 续培养可形成大量幼苗,等幼苗长到2〜4 cm高时,可转入生根培养基中进行生根培养。

2.3移栽

待幼苗的根长到1〜2 cm,取出小苗,洗去根部的培养基,移到珍珠岩和腐殖土(1 : 1)混合的基 质中栽培,覆盖保鲜膜一周后掀开,置于温度15〜25°C、相对湿度15%左右、自然光照50%的温室中 培养,成活率可达90%以上。

3讨论

本研究用木门百合子房作外植体,成功地诱导愈伤组织的形成和芽的分化。组织培养的成功将为 该品种的快速繁殖和开展相关的转基因操作奠定了良好的研究基础。杨薇红等[5]认为,花器官最佳诱导 分化的培养基为MS + 6-BA1. 2 mg/L + NAA 0. 1 mg/L,使用6-BA 1.0 mg/L配合低浓度 (0.1 mg/L)的NAA对芽的增殖最佳,增殖的苗长势强健、整齐度高。本研究的结果表明,影响子房 愈伤组织诱导的因素中,细胞分裂素的活性及其与生长素的配比、浓度高低均对愈伤组织的形成有极 大影响。MS+6 -BA 1. 0 mg/L+ NAA 0. 5 mg/L的培养基最适于诱导愈伤组织,所形成的愈伤组织 较易诱导成苗,同时外植体也不易发生褐变。使用具有高细胞分裂素活性的KT有利于启动子房的脱分 化,但外植体的枯死率上升。用2,4-D诱导愈伤组织的效果优于NAA诱导的效果,但却不利于随后 芽的分化。

在实验中还观察到,大于0.5 cm的子房切段作外植体不易枯死,接种前切除子房内的胚珠有利于 缩短愈伤组织形成所需时间。此外,用子房壁培养得到的无菌嫩叶比用鲜切花枝上的幼嫩叶片更容易 诱导愈伤组织,可能是一方面无菌嫩叶具有更强的分化能力,另一方面灭菌过程中对鲜切花幼嫩叶片 的毒害作用也影响愈伤组织的诱导。在同等